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wb背景过黑权威发布_wb背景黑(2024年12月精准访谈)

内容来源：德赛环球网所属栏目：观点更新日期：2024-11-30

wb背景过黑

你们wb的背景是黑色的吗[傻眼]我不会卡bug了吧

WB转膜必知的10个关键点，不看后悔！ WB转膜的十大注意事项⬇️ 1⃣️ 膜转反了𐟑‰ 转膜时记住“黑胶白膜”，即黑色部分对应膜，白色部分对应胶。 2⃣️ 膜上有气泡𐟑‰ 滤纸要充分浸湿，盖上滤纸后用左手轻压，右手用切胶板轻刮排掉气泡，冰浴转膜。 3⃣️ PVDF膜准备不足𐟑‰ PVDF膜具有疏水性，先在甲醇中浸泡激活3分钟，再用超纯水洗10秒，最后放到新配的转膜液中平衡1分钟再进行转膜。 4⃣️ 转膜后分不清蛋白面𐟑‰ 转膜前用剪刀在膜的右上角切掉一部分做标记，或者用圆珠笔在蛋白面（紧贴着胶的那一面）做标记区分，一侧1孔加marker一侧两孔加marker（有预算可以选择）。 5⃣️ 滤纸选择困难𐟑‰ 薄滤纸（1cm以下）可以一侧垫两张，厚滤纸一侧垫一张即可，根据转膜次数增多滤纸会变薄，需考虑更换会增加滤纸数量。 6⃣️ 转膜液保存不当𐟑‰ 10*转膜液需保存在4度冰箱，1*转膜液不可以长期保存，最好不要回收使用，否则影响转膜效率。 7⃣️ 显影后膜很脏𐟑‰ 避免手直接接触膜，使用镊子夹膜的marker部分，全程手套，手上的油脂等会影响转膜效率产生背景污斑。 8⃣️ 裁剪的膜和滤纸不合适𐟑‰ 如果膜裁切过大，会导致电流不能均匀通过膜，影响转膜并且浪费；如果膜裁切过小则影响实验。 9⃣️ 切胶不当𐟑‰ 切胶时注意切胶板垂直向下切胶，保证胶面整齐防止裂开。 𐟔Ÿ 冰浴很重要𐟑‰ 有条件尽量用冰块事先填满转膜电泳槽四周，以预先降低温度，没有条件可以用冰袋和水代替（不是非常推荐）。 ❤️ 下期预告：WB相关溶液的配制（转膜液、电泳液等）

𐟔젗B实验常见问题解答集锦一. 𐟏… 电泳常见问题电泳条带扭曲：可能是电泳槽内部电泳液未加满或漏液，及时加满电泳液可使条带变直。电泳条带拖尾：样本溶解不均匀可能导致拖尾，确保样本溶解后再上样。电泳条带扩散：加样量过多会导致条带扩散，适当减少上样量可改善。溴酚蓝呈笑脸状：泳道底部中间高、两边低，可能是制胶试剂温度高或制胶后未及时保湿，导致胶不均匀冷切。可降低电压，缓慢电泳，或在冰浴条件下进行。二. 𐟔„ 电转常见问题膜转反：注意“黑胶红膜”原则，即转膜夹黑色部分对应胶，红色部分对应膜。转膜夹放置错误：确保转膜夹红色对红色，黑色对黑色。背景有气泡：转膜过程中气泡会导致不均匀的白色斑点，转膜时要仔细检查，避免气泡产生。三. 𐟔’ 封闭常见问题背景脏：封闭不充分可能导致背景脏，可延长封闭时间或更换封闭液。条带有黑色斑点：封闭液未完全溶解会导致黑色斑点，封闭液需充分摇匀。条带信号弱：过度封闭可能使信号弱，可适当降低封闭液浓度或更换封闭液。封闭时间过长：封闭时间过长可能影响抗原抗体结合，建议封闭时间为常温1-2小时，并减少封闭液中的蛋白浓度。膜上有黑点和黑斑：可能是膜上其他部位与一抗或二抗非特异性结合，封闭液需完全溶解并混匀，选择纯牛奶作为封闭液，封闭后彻底清洗。非均一性背景：膜可能过干导致非均一性背景，操作过程中注意保持膜湿润。非特异性条带：封闭不彻底可能导致非特异性条带，重新调整封闭条件，选择适合的封闭液，适当提高封闭物浓度，延长封闭时间。抗体与封闭试剂反应：使用前过滤封闭试剂可避免此问题。四. 𐟐 孵一抗二抗常见问题蛋白条带信号弱：抗体孵育不完全可能导致信号弱，增加抗体浓度和延长孵育时间可改善。背景有白色斑点：抗体孵育不均匀可能导致不均匀的白色斑点，孵育抗体时使用摇床可避免此问题。

𐟓𑧺⧱𓋵0 Pro拍照秘籍 𐟌𘦃𓨦拍出绝美的春花照片吗？试试红米K50 Pro的专业拍照模式吧！这次我们带来了虞美人、向日葵、李子花和白色樱花的拍摄技巧。 𐟓𗥜見摄时，记得关闭【护眼模式】，并根据现场环境和花朵种类调整参数。快门速度（S）控制曝光时间，EV曝光补偿可以调整照片的明暗，ISO感光度影响画质和画面亮度，而WB白平衡则能让照片色彩更真实。 𐟒ᦵ‹光模式也很关键哦！平均测光适合大部分场景，中央重点测光适用于主体在画面中央的照片，而点测光则适合逆光人像或纯黑背景的拍摄。 𐟎‰最后，别忘了测试你的专业模式是否只能拍视频。如果是的话，只需在专业模式下拍摄按钮的右边再点击一下相机的图标即可解决问题。 𐟌𜧎𐥜襰𑥎𛨯•试吧，用你的红米K50 Pro拍出春天的美！

玄学WB实验的那些坑，你踩过吗？𐟘… 做WB实验的小伙伴们，你们是不是也遇到过一些让人头疼的问题？今天就来聊聊那些玄学WB实验中需要注意的事项，希望能帮到你们！背景脏乱差 𐟘– 有时候你会发现背景脏得不行，甚至有不规则的成片。这可能是因为封闭不充分。解决办法其实很简单：要么延长封闭时间，要么换换封闭液。相信我，这招绝对有效！条带上有黑色斑点 𐟤” 如果你发现条带上出现了黑色斑点，那很可能是封闭液没完全溶解。记得每次用封闭液之前都要充分摇匀哦！不然的话，实验结果可是会大打折扣的。条带信号太弱 𐟒” 有时候条带信号太弱，可能是因为过度封闭。这时候你可以试试降低封闭液的浓度，或者干脆换一种封闭液。毕竟，适度才是王道嘛！封闭时间太长 ⏳ 封闭时间太长也会影响抗原抗体的结合。一般来说，封闭时间在常温下1-2小时就够了。而且，封闭液中的蛋白浓度也要控制好，别太高也别太低。膜上出现黑点和黑斑 𐟖䊥悦žœ你发现膜上有黑点和黑斑，那很可能是膜上其他部位与一抗或者二抗发生了非特异性结合。这时候，封闭液一定要完全溶解并混匀，封闭牛奶也要选纯的。封闭结束后，记得好好洗干净哦！希望这些小贴士能帮到你们，让你们的WB实验更加顺利！如果还有什么问题，欢迎留言讨论哦！𐟒쀀

花艺摄影基础：设备与后期调色全攻略大家期待的花艺摄影小课堂终于来了！今天我们来聊聊如何用相机捕捉花朵的自然美。松鼠拍摄花艺作品的原则是尽量接近自然光下肉眼看到的花朵色彩。设备参数相机：SONY R7 第一代镜头：55MM 定焦头（ZEISS）摄影灯：常备一盏摄影灯，补充不够的自然光三脚架：拍摄静物速度很慢，三脚架是必备拍摄参数光圈：F4.5-F9居多小光圈拍摄：图3.4，光圈在F7.2-F11，基本花朵能够全部清晰大光圈拍摄：图5，光圈在F1.8-F2.2，凸显某局部花材，景深感强制造大色块速度S：1/25以下时需要脚架 ISO：<400（考虑平面打印） WB白平衡：自动，后期调整文件：RAW文件光线（仿自然光) 拍摄花朵最难的就是光源。充足的光线并不能保证效果完美。很多朋友会说家里光线太好了吧，其实松鼠不用自然光拍摄。白天当阳光充足时，会把摄影灯放在和窗户同一边补充焦点光线。如果光源太散，就把窗帘拉上，用灯打光。如果房间侧光很强可直接拍摄，但是窗户较多、光源分散的话，很容易把作品拍成大平板。室外也同样。背景 M㻲e品牌调性现代简约，所以并不会在背景上大做文章。一切还是以突出花的色彩为主，背景纯白色居多。ART系列纯黑色。白色背景还有一个原因，彩色的背景很容易影响花的色彩，所以为了后期节省时间调色，松鼠喜欢纯白的背景。后期软件：PHOTOSHOP/VSCO 花艺作品拍摄原则是还原花朵本生的色彩，所以不会用滤镜。成片文件格式为RAW，打开PS时，可以很简单调整白平衡、亮度、对比度和饱和度。不过太过于专业可能让大家头晕，今天用手机软件VSCO和大家分享下具体松鼠如何做后期。曝光：+1.0左右（原片往往相机显示为-1，为了避免曝光拍照时稍微偏暗，后期调整）对比度：0至+1 饱和度：选择单一色彩调整，作品里面积最大的主色饱和度稍微调高可以让色彩感更好。构图往往相机的照片尺寸非常大，松鼠喜欢在电脑里取照片的局部做画面。总结越简单的拍摄对花的平衡感、色彩搭配、立体感要求越高。𐟐🯸也经常会通过照相机找花的缺点，但是当你碰到拍摄很久都不好看时，首先要反省的是花，要知道好的作品可能1分钟就可以完成拍摄哦。如果你喜欢𐟐🯸拍摄小课堂请手动赞一下哦！

封闭环常见问题及解决方法总结𐟓‹ 大家好，我是盛夏学姐！最近大家在封闭环实验中遇到的问题主要集中在以下几个方面，今天我就来给大家详细讲解一下这些问题的原因和解决方法。 ⚠️常见问题：发光后，膜上颗粒感明显：这通常是因为奶粉或BSA没有完全溶解。建议提前配制好，最好在摇床上45转/分钟慢摇30分钟，必要时可以用搅拌器搅拌。膜上全黑一片，什么也看不见：这可能是因为封闭时间不够或者使用的封闭剂质量不好。推荐室温下封闭4-6小时，或者4度摇床封闭过夜，快封时一定要挑选好质量的产品。膜上出现一片黑的+些许颗粒感：这通常是因为膜没有妥善保存，出现了污染。建议在使用前仔细检查膜的保存情况。膜上出现几条黑色的背景，其他没啥：这可能是因为TBST失效，没有清洗干净。建议配制后尽快使用，不要超过一个月。膜上能看到明显的条带，但是背景整个还是很黑：这可能是因为抗体的特异性不足。可以尝试过夜封闭或者更换抗体。除主带外，还有其他杂带，且主带更黑：这可能是因为封闭时间不够或者抗体特异性较差。建议延长封闭时间或者降低抗体浓度。膜上全黑，但是条带的位置反白：这可能是因为封闭不彻底或者二抗浓度过高。建议延长封闭时间并降低二抗浓度。 ⚠️解决方法：奶粉/BSA提前配制，最好在摇床上45转/分钟慢摇30分钟，必要时可以用搅拌器搅拌。封闭时间推荐室温4-6小时，或者4度摇床封闭过夜，快封时一定要挑选好质量的产品。 WB任何步骤，膜不宜长时间置于TBST以外，并且发光时最好铺一张手套膜，避免之前同学的发光液或者异物残留。 TBST配制后，使用时间不宜超过一个月，否则吐温失效会影响到洗膜效果。抗体杂带过多时，建议过夜封闭或者退换货。膜上全黑+反白，建议延长封闭时间并降低抗体浓度。今天的分享就到这里啦，大家还有什么问题欢迎在评论区继续讨论和答疑哦！𐟑‡𐟑‡

蛋白印记WB实验心得分享 𐟌ˆ 做了大约三年的WB实验，积累了不少经验教训，以下是一些个人建议，希望能帮到大家：制胶小贴士 𐟧ꊦ— 论是自己制胶还是购买成品，都要注意质量问题。玻璃片要彻底清洗干净，用纯水润洗并烘干。灌胶时要避免用手直接接触，因为手套上可能有灰尘和指纹。按比例配置下层胶，确保完全凝固（大约需要五十分子的时间，如果室温较低，可以适量增加APS的量）。亚胶用纯水即可，上层胶要快速灌入并立刻插上梳子。注意自己要配几块胶，避免浪费。一抗选择 𐟐⊤𘀦Š—的选择非常重要，不要贪图便宜买差的。CST的一抗效果很好，虽然价格稍高，但能出结果。如果使用Affinity的一抗，可能需要进行更换。电泳液和电转液 𐟌Š 电泳液和电转液要现配现用，旧的电泳液可以放在电泳槽外侧，内侧用新的。转膜液要用新的，最多放两次，并补充无水甲醇。转膜时间 ⏱️ 不同分子量的蛋白需要不同的电转时间。一般来说，分子量越大，转膜时间越长。如果转膜时间过长或过短，都会影响后续显色效果。转膜时，胶与PVDF膜之间不能有气泡，这决定了膜的外观和蛋白印迹的完整性。封闭液选择 𐟥› 封闭液可以选择Sigma的BSA或小青蛙的脱脂牛奶，建议用5%的BSA。如果洗膜不充分，膜的背景会很黑。如果出现黑点，可能是封闭液没溶解好或没洗干净。希望这些小贴士能帮助大家在WB实验中少走弯路，取得更好的实验结果！

WB实验全攻略：从零开始到成功曝光在WB实验领域摸爬滚打了四年，我积累了不少心得。从细胞培养的第一步到最后的化学发光成像，每一个细节都至关重要。两天的辛勤工作，往往在曝光的瞬间决定成败。下面是我总结的一些关键步骤，希望能帮到你们。电转：关键的一步 𐟔犦🀦𔻐VDF膜：PVDF膜需要在甲醇和4度中激活30分钟。电泳后处理：电泳结束后，取出胶板，短玻璃板朝上放置。揭开短玻璃板后切除多余的胶，在水中将胶从长玻璃板上取下。转膜：在电转液中，转膜夹黑色面朝下，依次放置石棉网-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-石棉网，夹紧转膜夹，注意PVDF膜要与胶贴合，排走气泡。调整转膜夹黑色界面转向转膜槽负极，白色面朝向转膜槽正极。灌满电转液后，用200mA恒定电流转膜120分钟（具体条件自行探索），转膜槽外周装满冰块。封闭：去除背景的关键 𐟐„ 转移膜：将膜取出后，应观察到marker完全从胶转移至膜上。清洗：用TBST快速清洗掉膜上残留的电转液。封闭：将PVDF膜浸泡在5%封闭牛奶中，缓慢摇荡，室温孵育1小时。抗体孵育和化学发光成像：让蛋白可视化 𐟌Ÿ 一抗孵育：封闭结束后，用1㗔BST缓冲液洗掉多余的牛奶，洗膜每次5分钟，共3次。一抗使用一抗稀释液或TBST按照1：5000稀释（具体条件自行摸索），然后将膜浸泡在一抗中，于4℃冰箱中摇床孵育过夜。二抗孵育：一抗孵育后并回收，加入1㗔BST缓冲液放置于摇床上快摇5分钟，共3次。使用5%脱脂牛奶按照1:1000稀释二抗，室温慢摇1小时。化学发光成像：二抗孵育完毕后，回收二抗，1㗔BST快洗5分钟，共3次。洗膜结束后，将发光液敷在膜上，通过化学发光成像仪曝光，采集并使用ImageJ分析灰度。希望这些步骤能帮到你们，祝大家实验顺利！𐟒ꀀ

肖战发布告黑公告，却迎来被告挑战，谁会被打脸？肖战这些年受到的网暴是叹为观止的，肖战方也在告黑的道路上坚持不懈，决不姑息。近日，上海九泽律所再次发布肖战的告黑公告，列出数名被告帐号，诉诸法律，维护艺人的名誉权。然而，某一帐号提前获知，发博称，自己一直被禁，一直在，禁他的明星都在WB和娱乐圈消失了，决定演员命运的是观众。讲真，因不当言论被告已是有错在先，侵犯了他人的权益，如此不认错反叫嚣，态度可谓猖狂至极。也是让人再次明白，这世上确有不知悔改，见了棺材也不落泪的冥顽不灵之人。不过，悔不悔改，该受的制裁虽迟但到，每个人都要为自己的言行负责，狂也要负法律责任。一直犯错那就一直被告，一直受罚。另外，决定演员命运的因素有很多，观众是其一，但与个别观众无关，与个别观众喜好更无关。你可以不喜欢某位明星，但你不可以任意去伤害他人，语言也不行，这是法律常识，可惜有些人不懂，或偏要知法犯法，想投机取巧，觉得自己是小人物没事，以为法不责众。但是随着网络清朗的展开，网络再也不是法外之地，人人都要为自己的言行负责，犯错就要受罚，虽会迟但必到。肖战在娱乐圈历经坎坷，被针对，被诋毁，却迎风而上，一骑绝尘，靠的是干干净净做人，踏踏实实做事，无论作品人品都值得称道，一路行来打脸了无数谣言，赢得了业内外的普遍认可，称得上真金不怕火炼。谁是谁非，谁会被打脸，相信时间会告诉你一切。

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