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免疫组化背景权威发布_免疫组化背景深与哪些因素有关(2024年12月精准访谈)

内容来源：德赛环球网所属栏目：观点更新日期：2024-12-03

免疫组化背景

西湖大学生命科学学院夏令营回忆录 ### 面试复盘 𐟓Š 在西湖大学生命科学学院的夏令营中，面试环节真是让人又爱又恨。整个面试过程大约25分钟，包括12分钟的PPT汇报（全英文制作，但可以选择中文或英文汇报）和13分钟的专家问答及英语口语考核。提问环节真是五花八门：你做了哪些研究工作？请在30秒内解释你的研究意义。你的研究和专利之间有什么关系？你的专利模型看起来很复杂，花了多久时间？为什么选择去实验室学习基础实验？能否介绍一下其中一个实验的流程？免疫组化的流程是怎样的？这些问题真是让我又爱又恨，但也在一定程度上展现出了专家们的严谨和热情。一些感性认识 𐟌🊊西湖大学的图书馆真是舒适，到处都是懒人沙发，视野开阔，能看到瞬息万变的云朵和晚霞。还有一些小细节，比如公寓楼电梯口的公用花露水，小区楼下篮球场旁的儿童公园，没事可以去荡秋千。每天晚上，我和室友都会去西餐厅，直到看到西湖官微的一篇推送，才知道那位厨师小哥还有这样的个人故事。有幸体验了他们有名的咖喱牛肉饭和好吃的披萨𐟍•。一些收获和思考 𐟒ኊ这次夏令营让我深刻感受到，大家对自己的研究课题都充满了激情和想法。浓厚的学科交叉氛围让我印象深刻，比如化学背景的研究者会从分子结构的角度看问题，“路上拉一个同学聊聊天，灵感可能就来了”。有个同学问，怎么确定一个热爱的方向/自己感兴趣的研究问题。老师的回答非常富有哲理，“兴趣是个假问题”，因为了解还很模糊。多问问自己，更喜欢从什么角度去了解问题——“蛋白质/小鼠/细胞？”“宏观/微观？”去看看实验室真正在做什么——“观察小鼠行为？养果蝇？胚胎发育？”在与世界的一次次交手中，我们逐渐发现自己感兴趣的东西。西湖夏令营带给我的思考还有很多，潜在影响也许也是巨大的。特别感谢这个夏天的经历，共勉[拥抱R]

免疫组化实验全解，必看！ 𐟔젦Š€术原理：免疫组化是利用免疫学基本原理——抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质），进行定位、定性和定量研究。 𐟓 实验步骤：切片脱蜡至水抗原修复 3%双氧水处理，画圈，血清封闭一抗4Ⰳ过夜孵育二抗室温孵育显色苏木素染核，脱水，透明封片，显微镜观察 𐟓栩€样运输要求：石蜡切片制片：组织取样后应立即放入固定液中，避免冻存。冰冻切片制片：应取用新鲜组织，以免抗原丢失。组织蜡块可长期保存，但石蜡切片理论上不超过半年，冰冻切片不超过3个月。 𐟓 注意事项：苏木素复染时间需摸索，尤其是阳性染色在细胞核上。 DAB显色时间需优化，镜下观察达到阳性染色明显但背景不深。抗体孵育时间和浓度需摸索，尤其一抗孵育最好在4度过夜。切片脱蜡和水化要充分，加反应液时要覆盖组织充分，每次加液前甩干洗涤液，防止干片。用组化笔画圈时尽量画大一点，否则墨水排斥液体，引起片周边干片。 𐟤” 常见问题：片子着色不均匀？脱蜡不充分：可以60℃烤20分钟，立即放入新鲜的xylene。水化不全：应经常配制新鲜的梯度乙醇。抗体没混匀：用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂。抗体孵育时，切片放倾斜。抗体孵育后PBS冲洗不充分。制片厚薄不均匀：染片盒不平，切片倾斜。 𐟌᯸ 一抗从4℃拿出后，为什么有人说要37℃复温？防止切片从4℃直接放入PBS易脱片。使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用。4℃和37℃时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。 𐟌미 切片染色后背景太深，不易区分特异性与非特异性着色？抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体。

科研之路：我在科研小组的五年成长经历𐟌Ÿ 有幸因为科研，我的单人照被放在了本科毕业纪念推文中有幸因为科研，辅导员记住了我的名字有幸因为科研，我的简历变得非常漂亮有幸因为科研，考研复试前联系导师时，得到了导师的认可：“你的背景很优秀，欢迎报考” 我大一上学期加入了科研小组，转眼间五年过去了。这五年里，我收获了很多，感谢科研小组的导师和师兄师姐们的耐心指导，也感谢自己坚持不懈的努力。导师按照研究生的标准来培养我们，科研技能、科研思维和课题论文写作能力等方面都得到了全面的提升。以下是我在这段时光中的经历和收获。实验技能𐟔슦ˆ‘熟练掌握了多种实验操作，比如HE染色、免疫组化、细胞实验、Western blot、CCK8等。不仅仅是操作，我还深入了解了每个步骤的原理。课题𐟓š 在大二到大三期间，我写了两份课题申报书，并成功申报了国家级大学生创新创业训练项目。这些项目从校级开始挑选，经过省级，最终到达国家级。奖项𐟏† 我两次带队参加了学校的课题申报书大赛，分别获得了一等奖和三等奖。还多次获得年级的学术科研奖。这些奖项的评选需要经过答辩，这些经历大大锻炼了我的临场应变能力。论文𐟓 大二时，我参与发表了一篇中文论文（二作）。大三时，我与其中一位导师一起写了一篇英语论文（共同一作），但因为一些学术争议，现在还没有投出去，这是我本科期间较大的遗憾。现在快毕业了，我还在和导师一起研究新课题，正在写一篇英语论文，希望暑假能顺利投出。科研思维𐟧 这其实是科研中最重要的部分！导师一直强调，光会做实验的只是机器，严谨细致的科研思维才能让人在学术研究中真正有所为。他还经常说，搞科研就像探案一样，抽丝剥茧找线索。好的课题和论文绝对不是文字堆积，而是字与字、行与行之间充满逻辑的。当然，这需要大量的训练，导师也常感叹自己逻辑思维不够强（其实已经很强了）。写在最后，我知道这些小成果在学术大咖面前根本不值一提，我也深刻知道自己还有很多东西要学习，所以一直在路上。希望有一天能成为一个优秀的学者和医生。

单细胞揭秘！ESCC奥秘大家好！今天我们来聊聊肿瘤代谢重编程的单细胞研究，这可是个热门话题哦！𐟔劊𐟌ˆ 研究背景 𐟌ˆ 代谢重编程在肿瘤的增殖、转移和抗药性中扮演着重要角色。了解恶性和非恶性细胞的代谢特点，对于治疗食道鳞状细胞癌（ESCC）有着重要的意义。然而，目前关于ESCC中代谢异质性和肿瘤微环境（TME）的研究还很少。 𐟧 研究思路 𐟧 为了探究这个问题，我们对5例肿瘤标本和5例配对的非恶性肿瘤标本进行了scRNA-seq分析，构建了肿瘤细胞和免疫细胞的细胞间通讯图谱。我们的目标是揭示代谢相关通路在不同细胞群中的异质性，筛选出肿瘤特异性基因，并挖掘ESCC潜在的新标记物。最后，我们用公共数据库中的bulk RNA数据以及实验手段（如流式细胞术、qRT-PCR、免疫荧光和免疫组化）来验证scRNA分析的结果。 𐟌Ÿ 研究结论 𐟌Ÿ 通过scRNA-seq数据，我们构建了一个单细胞转录组图谱，对正常食道组织和ESCC中的上皮细胞、基质细胞和免疫细胞进行了深入分析。这些数据揭开了肿瘤微环境中各种细胞类型的代谢重编程，有助于我们更好地理解ESCC患者的TME和细胞异质性，为未来探索ESCC的发病机制和确定潜在治疗目标提供了宝贵的资源。 𐟔 为什么选择scRNA-seq？ 𐟔 代谢重编程与scRNA-seq技术是珠联璧合，相得益彰。代谢重编程的研究热点与scRNA-seq技术相辅相成，恰如其分！为什么这样说？这个问题大家可以细细品味... 希望这篇文章能对你有所帮助，一起加油！𐟒ꀀ

英文名：iFluor 532 goat anti-rabbit IgG (H+L) 中文名：iFluor 532羊抗兔免疫球蛋白(H+L) 激发波长(nm)：536 发射波长(nm)：560 供应商：陕西新研博美生物科技规格：5mg，10mg，25mg 纯度：≥95% 溶解性：溶于水或部分有机溶剂稳定性：稳定性较好，但需注意避免频繁解冻，保持干燥、避光和避氧气的环境。 iFluor 532羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)是一种高度特异性的荧光抗体，专为免疫荧光染色设计。它结合了iFluor 532这一明亮的绿色荧光染料与羊来源的针对鼠类免疫球蛋白（包括重链H和轻链L）的抗体。这种抗体能够特异性地识别并结合到小鼠来源的抗体上，广泛用于免疫学实验中的二抗检测，如流式细胞术、免疫组化及细胞成像等。iFluor 532羊抗鼠免疫球蛋白(H+L)以其高灵敏度、低背景荧光和良好的信号强度而著称，为科研人员提供了准确且直观的检测结果，是研究小鼠抗体反应、细胞表面标记物及细胞内抗原分布的重要工具。

HPV和p16双阴性口咽癌患者预后最差 2023年2月13日，Lancet Oncology杂志发表了一篇题为“Prognostic implications of p16 and HPV discordance in oropharyngeal cancer (HNCIG-EPIC-OPC): a multicentre, multinational, individual patient data analysis”的文章。该研究背景显示，p16在恶性肿瘤预后评估中已经得到广泛应用，尤其在宫颈癌中，其可靠性较高，并能辅助指导治疗强度的调整。然而，单纯使用p16也存在一些问题，因此在某些肿瘤类型中，结合其他明确的致癌性病原进行检测，评估预后更为可靠。本文总结了多中心、多国参与的数据分析结果，旨在为患者提供更安全、个体化的治疗方案，避免过度治疗。 𐟓… 数据时间范围和来源：1970年1月1日至2022年9月30日以英文发表的系统评价和原始研究。 𐟑堥‚与者人数：7654人符合p16和HPV分析的条件。其中5714名（74.7%）为男性，1940名（25.3%）为女性。 𐟓Š 结果显示，口咽癌患者中，p16-/HPV+或p16+/HPV-标志物差异表达的患者预后明显差于p16+/HPV+的患者，而预后明显好于p16-/HPV-的患者。在常规p16免疫组化的同时，应强制要求所有患者在临床试验中进行HPV检测（或至少在p16检测阳性后），并建议在HPV检测结果可能影响患者治疗的情况下，特别是在HPV归因比例低的地区进行常规p16和HPV联合检测。简而言之，依据目前的数据分析，HPV和p16双阴性预后最差，最好术后辅助更强的补充治疗方案，而双阳性的预后最好，相对患者的心理负担会低些。拿着这个结果，至少在面对患者提问时，可以有比较可信的数据进行分析。当然，这只是数据分析的结果，其实一些不确定因素还需临床继续探索。

封闭液大揭秘：你选对了吗？𐟤” 在生物实验中，封闭液的选择至关重要，它能够影响实验的准确性和可靠性。那么，有哪些常见的封闭液呢？让我们一起来了解一下吧！脱脂奶粉 𐟥› 脱脂奶粉成分复杂，含有多种蛋白质。由于其经济实惠且封闭效果全面，是很多实验的首选。但请注意，脱脂奶粉可能含有少量生物素和碱性磷酸酶（AP），以及酪蛋白（磷酸化蛋白），因此不适用于生物素标记和AP标记的抗体系统，也不适用于磷酸化蛋白的检测。牛血清白蛋白 (BSA) 𐟐‚ 如果你正在分析磷酸化蛋白，BSA是一个不错的选择。虽然BSA成分单一，但普通级别的BSA可能含有IgG或其他血清蛋白，这些蛋白会与哺乳动物抗体（如抗牛、山羊、绵羊、马等二抗）产生交叉反应，增加非特异性背景信号。因此，建议使用不含IgG的BSA产品。相对于脱脂奶粉，BSA不含生物素，对于生物素标记的抗体系统而言，可能是最好的选择。血清 𐟩𘊨ဦ𘅥您ƒŽ牛血清FBS含有大量的蛋白质，可以用于封闭。但与BSA一样，它含有免疫球蛋白和血清蛋白，这些蛋白会和哺乳动物抗体产生交叉反应，增加非特异性背景信号。而且血清价格更加昂贵，需要的浓度更高，因此在WB实验中血清一般用的较少，它更多地应用于免疫组化和免疫荧光实验中样本的封闭。明胶 𐟐Ÿ 明胶是胶原蛋白的产物，从冷水鱼皮肤中提取出来的明胶即使在低温情况下也不会凝固。通常使用浓度为0.1-5%。与BSA和血清不同，明胶不含任何血清蛋白，因此不会和哺乳动物抗体产生交叉反应，这大大降低了非特异性背景信号。但请注意，鱼胶含有内源生物素，因此不适用于生物素标记的抗体系统。混合型封闭液 𐟌€ 混合型封闭液（脱脂奶粉+BSA+FBS+明胶）的封闭效果最好，信号最强。这种封闭液综合了各种封闭液的优点，能够提供更全面、更可靠的封闭效果。大家一般喜欢用哪种封闭液呢？欢迎在评论区分享你的经验！

WB新神器！科研更高效𐟚€ 嘿，科研界的小伙伴们！今天咱们来聊聊WB实验中的“内参”那些事儿𐟔‘。大家都知道，WB（Western blot）是蛋白检测的金标准，但想要做好可不容易哦！高背景、非特异性、假阳性…这些问题真是让人头疼。不过别担心，掌握好内参的使用，这些难题都能迎刃而解啦！ 𐟔 为什么要用内参？在WB实验开始之前，我们通常会通过生物化学方法测定蛋白总量，确保每个孔都有等量的蛋白。内参就像是实验中的“监督员”，它能帮助我们确认所有样品都已上样，电泳是否正常工作。而且，大多数科学杂志都要求WB结果中包含内参数据哦！ 𐟓Š 如何归一化WB结果？ WB是蛋白半定量的好工具。为了比较多个样品中目标蛋白的相对表达，我们需要将数据归一化。具体操作就是通过灰度值分析测定每个蛋白条带的强度，然后除以内参的条带强度。这样，我们就能更准确地比较不同样品间目标蛋白的表达变化啦！ 𐟔젩€‰择内参抗体的小窍门：分子大小：内参蛋白的大小要和目标蛋白区分开，这样才能更准确地分析数据。线性范围和上样量：确定样本的线性范围，避免上样量过高或过低产生的误差。表达强度和稳定性：选择高表达且稳定的内参，比如那些由保守基因编码的蛋白。 𐟔젦�𑉨熧•Œ学术平台：医学生物的AI图像分析工具！𐟌Ÿ 武汉视界学术平台有什么优势？ AI图像识别：强大的AI技术，让图像识别更精准、更高效。多功能软件：覆盖Western blot、病理染色、免疫组化等多种应用（持续研发），满足你的各种需求。数据可视化：输出精美图形和图表，让数据分析变得简单直观。操作便捷：WB一键识别分析，WB一键统计及画图，WB三维视觉导图。服务对象：生物学专业学生、导师、科研人员（实验室）利用平台提供的AI算法和数据分析工具，让你的科研工作更上一层楼！科研路漫漫，有了武汉视界学术平台，图像分析不再难！快去试试吧，让你的科研工作更加高效！𐟚€ 希望这些小技巧能帮到大家，让WB实验变得更加顺利！记得点赞、收藏哦~ 一起在科研的道路上越走越远！𐟚€

如何写出高水平论文？这些要点你必须知道！写一篇高水平论文可不是一件容易的事，但也不是不可能。一般来说，一篇高质量的论文需要具备以下几个特点：假说要有创新性 𐟚€ 首先，你的假说必须要有新意，有创造性，而且要有较大的理论或实际应用价值。简单来说，你的研究要能解决某个科学问题，或者能提出一个新的观点。证据要充分且严谨 𐟔 支持你假说的证据必须充分且严谨。这意味着你需要提供多种来源的实验数据来支持你的结论。比如，要证明某个基因与癌症的关系，你可以用体外细胞实验、动物模型实验和人体临床数据来支持你的假说。数据解释要合理，结论要清晰 𐟓Š 你的数据解释要合理，结论要清晰。论文的写作要让复杂的东西变得简单易懂。如果你的论文写得让人一头雾水，那可能就有点低水平了。写作技巧 ✍️ 好的SCI文章不仅内容丰富，写作也要让复杂的东西变得易懂。你可以从以下几方面着手：多种证据支持：尽可能提供多种实验方法来论证你的假说。比如，可以用免疫组化的方法在蛋白质水平显示细胞内表达的分布情况，也可以用定量逆转录PCR的方法在mRNA水平检测基因的表达。直接证据：要取得直接证据，可以用ChIP实验来证实转录因子蛋白可直接与下游基因的启动子结合，从而上调下游基因的表达。完整的故事：发表高水平论文，单做一两个实验是不够的，需要做一系列的实验来把你的论据和论证串通起来，形成一个完整而严谨的科学故事。讨论部分要合理 𐟤” 在讨论部分，如何合理地解释数据结果也非常重要。经常发高水平论文的人其实也是原始数据解释的高手。有些人有好数据，却因为没有合理的解释好，所得出的结论不够清楚，导致论文档次下降。写作建议 𐟓– 分析文献：看看是否能从文献中得到启发。请同行审阅：请经验丰富的同行认真阅读你的论文，提出建议，弥补你想不到的地方。让非专业人士也能看懂：写专业性很强的科技论文，能被学科背景不是太强的半外行容易看懂很重要。如果有两个或以上的审稿人都误解了你的论文，那一定是你写作有问题。可以在写完之后给英文不错但专业背景不深的朋友阅读，如果她们能理解，说明这篇文章就把事情说清楚了。总之，写一篇高水平论文需要付出很多努力和汗水，但只要你用心去做，还是有可能的。加油吧！𐟒ꀀ

免疫荧光实验常见问题解答在进行免疫荧光实验时，可能会遇到一些常见问题。以下是一些实用的建议和解决方案：空白对照：对于石蜡切片的免疫组化，空白对照是必须的。目的是观察自发荧光。脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。阴性对照：标本直接滴加二抗，应呈阴性反应。抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，再加入抗免疫球蛋白荧光抗体。未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。固定方法：细胞固定通常使用甲醇，而切片固定则使用多聚甲醛，染色方法相同。二抗标记：如果你的二抗是用FITC标记的，分装及观察时都要避光，以避免荧光分解。封片方法：封片最好使用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液，这样可以使玻片更透明。免疫酶染色：如果使用过氧化物酶做标记，必须用3%H2O2去除内源性过氧化物酶。苏木素复染：如果需要进行苏木素复染，可以用盐酸溶液去除苏木素。激光共聚焦显微镜的使用：激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜高得多。如果遇到模糊现象，首先要排除荧光显微镜的问题，如紫外灯泡寿命到期等。如果荧光显微镜没有问题，则以共聚焦显微镜的结果为主。激光共聚焦显微镜的操作：熟悉激光共聚焦的使用方法，开机和关机顺序要注意，尤其是激光器的使用，务必要预热10到15分钟方可打开激光。在smart set up中选择best signal，对应相应的激光波长选择相应的颜色（488-FITC，568-RHOD，647-White），后期也可在软件中进行修改。拍摄过程中要注意选择的像素和拍摄速度，一般选择1024*1024，speed为5-7。 Pinhole值不宜过大，在操作过程中可点击1AU-Max，获得荧光强度适宜的图层。为拍摄出完美的荧光图，可通过调整Gain值改变荧光强度，再通过调整Digital Offset和Digital Gain来降低背景噪音以及调整荧光强度。通过这些建议和解决方案，你可以更好地进行免疫荧光实验，获得更准确的结果。

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